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化學(xué)發(fā)光免疫分析主要技術(shù)與發(fā)展...

化學(xué)發(fā)光免疫分析主要技術(shù)與發(fā)展趨勢

發(fā)布日期:2020-06-09 作者: 點(diǎn)擊:

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù) (chemiluminescence immunoassay, CLIA) 起步于20世紀(jì)80年代初,快速發(fā)展于20世紀(jì)90年代,成為繼熒光免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)及酶聯(lián)免疫技術(shù)后發(fā)展的一項(xiàng)新興免疫檢測技術(shù)。化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)是利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體,使其從激發(fā)態(tài)回到基態(tài),當(dāng)中間體從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)釋放等能級的光子,再對光子進(jìn)行測定而進(jìn)行的定量分析技術(shù)。


化學(xué)發(fā)光分析是利用化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光現(xiàn)象,對化學(xué)發(fā)光物質(zhì)由激發(fā)態(tài)躍遷回基態(tài)時(shí)發(fā)出的光信號進(jìn)行測量的一種分析方法。根據(jù)免疫標(biāo)記物不同,化學(xué)發(fā)光分析種類大致分為以下三類:


直接化學(xué)發(fā)光免疫分析


直接化學(xué)發(fā)光,其特點(diǎn)是采用吖啶酯(圖2-1)、異魯米諾衍生物ABEI(圖2-2)等作為示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體分子形成發(fā)光標(biāo)記物,采用納米微球?yàn)楣滔噍d體的分離方式,通過堿性液誘導(dǎo)結(jié)合標(biāo)記物發(fā)光,并通過測定發(fā)光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)對超微量物質(zhì)的定量分析。


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圖2-1 吖啶酯直接化學(xué)發(fā)光反應(yīng)

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圖2-2 ABEI直接化學(xué)發(fā)光反應(yīng)

電化學(xué)發(fā)光免疫分析

電化學(xué)發(fā)光免疫分析是以三聯(lián)吡啶釕作為示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體,并采用納米微球?yàn)楣滔噍d體的分離方式,以三丙胺作為電子供體,通過電場作用誘導(dǎo)結(jié)合標(biāo)記物發(fā)光,通過測定發(fā)光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)對超微量物質(zhì)的定量分析(圖2-3)。

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圖2-3 電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)

酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析

酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析以酶蛋白標(biāo)記抗原或抗體制備酶結(jié)合物,利用酶催化發(fā)光底物反應(yīng)所提供的能量誘導(dǎo)光信號的產(chǎn)生,最終通過測定光學(xué)信號實(shí)現(xiàn)對待測物質(zhì)的免疫分析,簡稱“酶促發(fā)光免疫分析”。與酶聯(lián)免疫分析相同,酶促發(fā)光免疫分析采用辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)作為標(biāo)記物,不同的是酶促發(fā)光免疫分析采用發(fā)光底物。酶促化學(xué)發(fā)光免疫分析的發(fā)光類型屬于間接化學(xué)發(fā)光。(圖2-4)。

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圖2-4 HRP酶促化學(xué)發(fā)光反應(yīng)

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)發(fā)展至今已成為主流診斷手段,市場份額逐年大幅遞增,國外進(jìn)口品牌占據(jù)90%的市場份額,其中代表廠家如羅氏、雅培、貝克曼、西門子等。隨著化學(xué)發(fā)光技術(shù)不斷突破和改進(jìn),國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光廠家快速成長和發(fā)展,其中以深圳新產(chǎn)業(yè)為代表,其是中國第一臺全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀生產(chǎn)廠家,另外鄭州安圖、深圳邁瑞、蘇州長光華醫(yī)等國產(chǎn)廠家也快速成長。隨著國家相關(guān)政策支持和國產(chǎn)廠家技術(shù)的不斷完善,國產(chǎn)替代進(jìn)口是化學(xué)發(fā)光行業(yè)的發(fā)展方向(如表2-2)。

表2-2 化學(xué)發(fā)光免疫分析分類及代表廠家和代表機(jī)型

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化學(xué)發(fā)光發(fā)展新趨勢

一、技術(shù)升級替代

化學(xué)發(fā)光以其靈敏度高、線性范圍寬、特異性好、精確定量等優(yōu)勢,逐步替代傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫和定性產(chǎn)品,同時(shí)早期的微孔板式化學(xué)發(fā)光也逐步被磁微?;瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)所取代。從目前化學(xué)發(fā)光市場占有率和主流技術(shù)應(yīng)用看,非酶參與的直接化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光占比高于酶促化學(xué)發(fā)光,直接化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物分子量很小,便于對小分子物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記,能檢測的項(xiàng)目多于酶促化學(xué)發(fā)光,在臨床檢驗(yàn)應(yīng)用更廣泛。

二、國內(nèi)企業(yè)跨洋出海,擴(kuò)大海外影響力

國內(nèi)企業(yè)積極推動(dòng)海外銷售,國內(nèi)較大的化學(xué)發(fā)光生產(chǎn)廠家如深圳新產(chǎn)業(yè)、四川邁克等廠家積極參加美國臨床化學(xué)年會(huì)暨臨床實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療設(shè)備博覽會(huì)(簡稱AACC),阿拉伯國際實(shí)驗(yàn)室設(shè)備展覽會(huì)(簡稱Medlab Middle East)等大型實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療設(shè)備博覽會(huì)。深圳新產(chǎn)業(yè)于2017年成為中國第一家通過美國FDA 510(k)的化學(xué)發(fā)光廠家。

三、化學(xué)發(fā)光儀器向高通量、流水線化發(fā)展

化學(xué)發(fā)光儀器向高通量、模塊化、支持多項(xiàng)目聯(lián)機(jī)全線流水化發(fā)展,進(jìn)口廠家的流水線發(fā)展較早,包括羅氏、雅培、貝克曼、西門子都有自己成熟的流水線,目前羅氏的cobas e601單模塊檢測速度170測試/小時(shí),國內(nèi)廠家深圳新產(chǎn)業(yè)推出的Maglumi 4000 Plus 單模塊檢測速度達(dá)280測試/小時(shí),第一個(gè)測試16分鐘,且能和同型號儀器、生化分析儀、電解質(zhì)組合互聯(lián),拼接組成全自動(dòng)生化免疫流水線Biolumi 8000。隨著化學(xué)發(fā)光儀器系統(tǒng)向高通量、流水線化發(fā)展,將極大縮短樣本周轉(zhuǎn)時(shí)間,提升實(shí)驗(yàn)室工作效率。

四、化學(xué)發(fā)光項(xiàng)目日益完善

化學(xué)發(fā)光項(xiàng)目越來越豐富,覆蓋腫瘤標(biāo)志物、甲狀腺功能、激素、心肌標(biāo)志物、糖尿病、傳染性疾病、貧血等免疫檢測,為更多的臨床科室及科研院所提供完整的檢測方案,目前羅氏診斷可提供超過90種免疫檢測菜單,而國內(nèi)企業(yè)也不斷研發(fā)和創(chuàng)新,推出新的項(xiàng)目,深圳新產(chǎn)業(yè)目前有化學(xué)發(fā)光注冊證103項(xiàng),邁克生物有40多個(gè)項(xiàng)目,目前國內(nèi)廠家項(xiàng)目既有常規(guī)項(xiàng)目,同時(shí)也有一些特色項(xiàng)目,如肝纖維化、腫瘤標(biāo)志物糖類抗原CA50、CA242,自身免疫類等,差異化項(xiàng)目也能夠使國產(chǎn)儀器更快進(jìn)入三甲醫(yī)院。

來源:《中國體外診斷產(chǎn)業(yè)發(fā)展藍(lán)皮書》

作者:楊升、張金財(cái)、崔浩強(qiáng)、孫麗群

河南美凱生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、貿(mào)易于一體的具有獨(dú)立法人資格的新型現(xiàn)代化醫(yī)療器械企業(yè),公司產(chǎn)品主要涉血培養(yǎng)瓶,化學(xué)發(fā)光試劑,胃蛋白酶原試劑盒,院感監(jiān)測試劑等系列產(chǎn)品,且均已取得醫(yī)療器械注冊證。公司占地面積15000平方米,GMP標(biāo)準(zhǔn)廠房3000平方米,專業(yè)性研發(fā)實(shí)驗(yàn)室1000平方米,先后被授予國家高新技術(shù)企業(yè)、河南省工程實(shí)驗(yàn)室、河南省體外診斷試劑工程技術(shù)研究中心等榮譽(yù)稱號。企業(yè)實(shí)力雄厚,重信用、守合同、保證產(chǎn)品質(zhì)量,以多品種獨(dú)特經(jīng)營的原則,贏得了廣大客戶的信任。垂詢電話0395-3333801。


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