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這兩天,
經歷了第一批“網格化”篩查的市民發(fā)現,
有些小區(qū)已經重新進入“決賽圈”,
有些研判下來還是有風險的,
則延長了管控時間。
其中起到關鍵作用的,
是一份份核酸報告。
對于市民來說,核酸檢測看似只有兩步:登記采樣,等待數小時后在健康云App上查詢結果。事實上,在這看似輕松的兩步背后,還凝聚了基因擴增實驗室(PCR實驗室)檢驗人員的大量工作。
進入PCR實驗室必須“全副武裝”。新民晚報記者 徐程 攝(下同)
凌晨2時,這座城市的萬家燈火早已熄滅,而申城各家核酸檢測實驗室依舊燈火通明。一位位身著厚重防護服的檢驗人員,正在實驗臺前一絲不茍地進行核酸樣本的檢測,汗水不住地從額滲出,嘴里呼出的熱氣模糊了護目鏡。
待檢測的核酸標本堆了滿滿一桌子
采樣后,你的樣本經歷了怎樣的“奇幻漂流”之旅?新民晚報記者近日走進同濟大學附屬東方醫(yī)院南院檢驗科PCR實驗室,吳文娟主任為大家揭秘一份準確的核酸報告是如何誕生的。
標本擁有了“身份證”
“醫(yī)生,我今天在你們醫(yī)院做的核酸什么時候有結果呀?還要多久呀?”
“醫(yī)生,我急需核酸報告,能加急幫我檢測一下嗎?”
這幾天,申城各醫(yī)療機構的醫(yī)務人員總會接到這樣的問詢電話。很多人以為,核酸采樣后,直接用機器檢測很快就能出結果了。其實,從采樣護士在你的鼻部或咽部“輕捻慢攏”后,后續(xù)還包括了樣本簽收、核酸提取、核酸轉移、核酸擴增、結果審核等步驟。
核酸檢測樣本采集后,采集人員會清點數目,并用密封袋包裝好,用消毒劑噴灑消毒,然后放進樣本轉運箱,由專人送到核酸檢測實驗室。檢測人員收到樣本后會先對轉運箱消毒,并在開啟后對轉運箱內壁和標本采集密封袋二次消毒,之后才是拆開密封袋取出樣本。
“核酸的采集管上都有條碼信息,簽收人員要理清樣本來自哪一個社區(qū)或人群,是單采還是混采?!眳俏木瓯硎荆傲硗?,我們還會留意樣本上的時間,便于日后需要時回溯?!?/span>
之后,核酸樣本就將經歷“奇幻漂流”的第二步——要有“身份證”啦!檢驗人員則將這一步稱為“樣本前處理”。“PCR反應是在96孔板上實現的,每一個孔位都有自己獨一無二的身份?!眳俏木暾f。
檢驗人員為剛剛送到的樣本進行編號和信息錄入工作
看似只是“前處理”,但防備之心可是一點兒也不能松。檢驗人員要識別空管或溢灑情況的發(fā)生。尤其在大人群10:1混采時,小小的試管被拭子擠滿,一旦陽性樣本出現了溢灑,一方面可能造成其他樣本結果的污染(假陽性),另一方面對實驗室的生物安全產生威脅——這也是PCR實驗室的檢驗人員同樣要穿成“大白”模樣的原因——醫(yī)用帽子、N95口罩、面屏、護目鏡、醫(yī)用防護服、隔離衣、一次性鞋套、兩層手套,這些“束縛”卻能給檢驗人員創(chuàng)造最安全的環(huán)境。
此外,PCR實驗室要求嚴格分區(qū),最好是負壓實驗室。空氣流動只會從外向內,那么實驗室里的污染就不會擴散到外界,可以保證實驗室外面的安全。
與病毒“擦肩而過”或只有2毫米
拿到“身份證”的核酸樣本并不能直接測試,而是要先提取核酸,對其進行擴增。因此,核酸樣本“奇幻漂流”的下一站,是PCR加樣區(qū)——簡單來說,檢驗人員要把病毒的遺傳物質(核糖核酸)給“揪出來”。
此時,檢驗人員戴著雙層手套,在生物安全柜內一管一管地擰開螺旋蓋,手工吸取樣本,加入核酸提取板孔中,再擰上螺旋蓋將標本放回原處?!坝卸嗌俜輼颖揪陀卸嗌俅蔚闹貜筒僮?。”吳文娟說。那時,檢驗人員與新冠病毒“擦肩而過”的距離可能只隔著兩層乳膠手套——也就是2毫米,但核酸檢測工作不允許他們害怕。
檢驗人員正在進行核酸提取環(huán)節(jié)中的加樣步驟
獲得核酸后,檢驗人員用移液槍將核酸轉移至事先準備好反應液的反應管里,制成反應體系,讓它進入“奇幻漂流”的下一站:擴增分析區(qū)。
“不能出錯,不能有遺漏,不能發(fā)生生物安全事故??梢哉f檢驗人員全身時刻處于高度緊張的狀態(tài)。就單說‘加樣’,檢驗人員要用極小的槍頭將每個提取好的核酸,大概是一滴水的四分之一加入到試劑中,每一步操作都必須十二分謹慎。”吳文娟告訴記者,“我們迫切希望能有開蓋、加樣的儀器來‘解放’檢驗人員,可現有的儀器在速度上并不能令人滿意,遇上大樣本篩查只能靠手工操作?!?/span>
讓它變多才能檢測出來
經歷了復雜費時的前期制備過程,樣本終于來到了“奇幻漂流”的關鍵一站。樣本的采樣質量如何、核酸提取的質量如何、結果如何都將在此處見分曉。
這里不得不提一下曾斬獲諾貝爾獎的聚合酶鏈反應(PCR),這是20世紀80年代中期發(fā)展起來的一項體外核酸擴增技術,它可以將目標基因片段于數小時內擴增百萬倍至數億倍,成為當今生命科學研究最為重要且廣泛使用的技術手段之一。
怎么理解擴增?
如果把樣本提取出來的核酸看作是一塊土地,新冠病毒是種子,如何知道土地里有沒有種子?簡單的方法是,加點水和肥料(試劑),讓種子一個變兩個、兩個變四個、四個變八個……“病毒是看不到的,而且微量樣本也不容易檢測到,所以要讓它變多,才方便檢測出來?!眳俏木杲忉?。
經過復雜的前期制備工作,才能在PCR儀上進行擴增檢測。上機后,就是歷時約1.5小時擴增檢測,而且中間不能有停頓、不能有斷電、不能有儀器故障,核酸檢測才能完成
當反應管在機器上開始檢驗后,也就意味著“開弓沒有回頭箭”——從采樣到核酸制備任何一個環(huán)節(jié)出現問題都可能導致返工重測,從而使報告時間加倍。
3月15日,國家衛(wèi)健委發(fā)布《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第九版)》。其中,《方案》將解除隔離管理和出院標準修改為“連續(xù)兩次新型冠狀病毒核酸檢測N基因和ORF基因CT值均≥35(熒光定量PCR方法,界限值為40,采樣時間至少間隔24小時)”,這也讓很多“小白”知道,這兒的“CT”并非到醫(yī)院拍個CT,而是指擴增的閾值。“簡單來說, CT值越低,說明陽性越強;CT值越高,說明陽性越弱?!?/span>
作為初篩實驗室,只能向疾控中心報告“疑似陽性”?!拔覀儠T值登記報告,上報相應區(qū)域的疾控部門。隨后根據疾控的要求轉運原管標本以供復核。”吳文娟說,而PCR實驗室也會通過紫外線消毒。據介紹,通常陰性樣本會儲存一兩天以備查驗。
向你飛奔而來的報告背后是汗水
走到這,核酸樣本的“奇幻漂流”之旅并沒有結束。檢測人員需要對擴增結果進行分析:包括同批隨樣本檢測的陰陽性質控結果是否在控、基線設置、逐孔分析內標及樣本結果是否正常等。當陰陽性質控全部符合檢測要求,排除假陰性、假陽性可能,對異常結果樣本及時進行復核,確保無誤后才能最終報告結果,并上傳到健康云。
有人好奇,健康云核酸結果查詢里,“OFR1a/b陰性,N基因陰性”是什么意思?吳文娟解釋,這是新型冠狀病毒核酸的兩個特異性片段,“一般同一份標本中兩個基因檢測結果均為陽性,會判斷為陽性,單基因陽性則需復檢?!?/strong>
這幾天,PCR實驗室里的檢驗人員都在超負荷工作
“現在我們檢驗科的工作包括了‘愿檢盡檢’——市民需要核酸陰性報告這張‘通行證’的;‘應檢盡檢’——住院患者和陪護,還有醫(yī)院承擔的密接、次密接及高風險人群的核酸檢測。這幾天,還有網格化篩查的任務?!?/span>吳文娟的語氣里透露著疲憊。
那儀器運行時,檢測人員能輕松一會兒嗎?并不是,此時,新的一批樣本又來了,又要開始錄信息,提核酸,加樣……吳文娟說,隨著核酸樣本量不斷增大,檢驗人員一直是在超負荷運轉。
“防護服是不透氣的,全身罩在里面,剛穿上就會很熱。加之機器一刻不停,熱量積聚一天后整個實驗室會非常悶熱,即使開著空調室內溫度也會達到28-30℃。此外,實驗室里靜電也很強烈,因此也特別干燥?!彼f,“我們中的很多人已經連續(xù)幾天都沒有回過家了,大家都是‘5+2’‘白+黑’的節(jié)奏在工作,能夠躺下來休息一會,就覺得很滿足了?!?/span>