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血液培養(yǎng)(簡稱血培養(yǎng))是臨床微生物學實驗室最重要檢查之一,是診斷血流感染、菌血癥的“金標準”。
血培養(yǎng)的相關(guān)術(shù)語
1、套
從一個穿刺部位抽取血液分別注入一個或多個血培養(yǎng)瓶(通常包括需氧瓶和厭氧瓶)。
2、陽性率
單位時間內(nèi)(如每月每季度每年)血培養(yǎng)陽性套數(shù)與血培養(yǎng)總套數(shù)的比值。
3、污染菌
從血培養(yǎng)中分離到可能是標本采集或轉(zhuǎn)運過程中進入培養(yǎng)瓶的非致病微生物。常見污染菌包括座瘡丙酸桿菌(目前名為Cutibacterium acnes,痤瘡皮膚桿菌)、微球菌屬、芽孢桿菌屬(不包括炭疽芽孢桿菌)、凝固酶陰性葡萄球菌(不包括路鄧葡萄球菌)、氣球菌屬、棒桿菌屬(不包括杰氏棒桿菌)等。
4、污染率
單位時間內(nèi)(如每月、每季度、每年)血培養(yǎng)污染套數(shù)與血培養(yǎng)總套數(shù)的比值。
5、皮膚定植菌
通常定植于皮膚表面及毛囊內(nèi)的細菌,可在采集過程中進人血培養(yǎng)瓶導致假陽性結(jié)果。
6、臍帶血
臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。
7、監(jiān)測血培養(yǎng)
免疫功能嚴重受損患者(粒細胞缺乏、腫瘤化療等)尚未出現(xiàn)菌血癥臨床表現(xiàn)而為預防或搶先治療進行的血培養(yǎng)。
8、血流感染(bloodstream infection,BSI)
各種病原微生物及其毒素侵入血循環(huán)導致的系統(tǒng)性炎癥反應綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS),病原微生物在循環(huán)血液中呈一過性、間歇性或持續(xù)性存在。
9、導管相關(guān)性血流感染(catheter-related bloodstream infection,CRBSI)
與植人血管內(nèi)的導管(如外周靜脈導管、中心靜脈導管,動脈導管、透析導管等)相關(guān)的血流感染。
10、菌血癥
血流中出現(xiàn)細菌或真菌。
11、膿毒癥
因感染引起宿主反應失調(diào)而導致危及生命的器官功能障礙。
12、衛(wèi)星血培養(yǎng)
在微生物學實驗室以外,臨床科室和急診檢驗內(nèi)設立小型血培養(yǎng)系統(tǒng),以滿足標本及時送檢的要求,從而提高血培養(yǎng)的質(zhì)量、檢出和檢出速度。
13、危急值
提示患者處于急危重狀態(tài)的檢驗結(jié)果。通常,血培養(yǎng)陽性結(jié)果、腦脊液涂片或培養(yǎng)陽性結(jié)果等是微生物學危急值。結(jié)果應盡快回報臨床。
14、一級報告、二級報告和三級報告
血培養(yǎng)報警后,涂片結(jié)果是一級報告。一般是Ih內(nèi)發(fā)出。快速鑒定和直接藥敏結(jié)果是二級報告。最終鑒定和正式藥敏結(jié)果是三級報告,即最終報告。
15、陽性報警時間(time to positivity,TTP)和差異報警時間(differential time to positivity,DTTP)
在連續(xù)監(jiān)測血培養(yǎng)系統(tǒng)中,從采血培養(yǎng)到儀器報警的時間是TTP。判斷導管相關(guān)性血流感染時,經(jīng)導管和經(jīng)皮膚同時采血,如果有同一種分離株分
離,則后者TTP與前者TTP的差為DTIP。
16、直接藥敏試驗
血培養(yǎng)瓶報警后,使用陽性血培養(yǎng)液直接進行紙片法藥敏試驗。
17、培養(yǎng)假陽性
血培養(yǎng)陽性報警,而涂片染色未見細菌,轉(zhuǎn)種未生長。通常由過量血細胞呼吸作用導致。
18、臨床假陽性
實驗室報告了血培養(yǎng)陽性和菌種,臨床確定是污染面不是感染。
19、假菌血癥
血培養(yǎng)有污染菌生長,誤認為其導致了菌血癥;或臨床表現(xiàn)類似菌血癥,后被排除
20、隨訪血培養(yǎng)(follow-up blood cultures,FUBC)
為評估治療效果而進行的血液培養(yǎng)。
血培養(yǎng)的標本采集
血培養(yǎng)標本由護士或醫(yī)師采集,建議有條件的醫(yī)院組建專職采血小組。應制定標準化操作規(guī)程和步驟清單,并對采集人員進行培訓。微生物學實驗室工作人員應定期或不定期對血培養(yǎng)送檢合格率進行評價、并及時反饋。
血培養(yǎng)送檢合格率評價包括:標本標識,送檢血培養(yǎng)瓶的種類、數(shù)量、有無破損、采血量、送檢時間及污染率等。控制污染率≤3%。一旦污染率超過標準,應及時從手衛(wèi)生、采血過程等多方面綜合查找原因,并及時與臨床醫(yī)護人員進行溝通、必要時進行再培訓。一旦懷疑患者為血流感染,應在抗微生物藥物使用之前立即采集血培養(yǎng)標本;對已使用抗微生物藥物的患者,建議在下一次應用抗微生物藥物之前采集標本。
對于懷疑感染性心內(nèi)膜炎患者,建議立即在10min內(nèi)采集2-3套血培養(yǎng)(每套血培養(yǎng)包括一個需氧瓶和一個厭氧瓶),每套采血量16~20ml,如果培養(yǎng)24h未報陽,再采集1-2套血培養(yǎng)。對于兒童應根據(jù)體重調(diào)整采血量,見兒童血培養(yǎng)共識。對于中性粒細胞減少癥患者,采血總量不應超過患者全血量的1%(人體血液量約70ml/g)。在任何情況下,對成人患者只采1瓶血培養(yǎng)是不能接受的。
采血量是影響血培養(yǎng)陽性率最重要的因素,保證足夠血量可以采用雙側(cè)穿刺、每側(cè)2瓶(需氧瓶+厭氧瓶)。之前研究表明,單點一次抽血采集足夠血液總量同時接種所要求的血培養(yǎng)瓶,與多點采血的性能和靈敏度相當,但沒有被后續(xù)共識或指南采納。對感染性心內(nèi)膜炎推薦在24h內(nèi)至少進行3次穿刺采樣。一般每瓶8~10ml血液,禁止過少或過多,當每瓶血液少于5ml時,可能會出現(xiàn)假陰性或微生物生長延遲。當每瓶超過10ml時,可能會因為白細胞產(chǎn)生了大量的本底CO2,而造成培養(yǎng)假陽性。
血培養(yǎng)陽性后需要隨訪,看是否轉(zhuǎn)陰,特別是在以下情況,須再次采集血培養(yǎng)。包括:
(1)感染性心內(nèi)膜炎;
(2)骨髓炎;
(3)金黃色葡萄球菌菌血癥:
(4)念珠菌菌血癥等,
建議選擇外周靜脈進行穿刺采血,除非需要診斷CRBSI,否則不建議從留置的靜脈或動脈導管采集血標本。切忌在靜脈輸液側(cè)肢體采集血培養(yǎng)。如果患者輸液無法停止,應在對側(cè)肢體采集血培養(yǎng)標本。臍帶血血培養(yǎng)血量為1ml,直接注入需氧血培養(yǎng)瓶或兒童瓶,不常規(guī)進行厭氧培養(yǎng)。極特殊情況可以選擇動脈穿刺采血,動脈血在污染率和檢測敏感性力面與靜脈血相似。通過預先留置的導管取樣會增加污染風險,但從新置入的靜脈導管(1h內(nèi))采集,其污染率與外周靜脈并無差異。
對預置導管患者,如果疑似CRBSI,在準備拔除導管的情況下建議在拔出導管的同時,送檢2套外周靜脈血培養(yǎng)和導管尖端5cm進行半定量培養(yǎng)。在不拔出導管的情況下建議至少同時采集2套血培養(yǎng),一套從外周靜脈,另一套從導管采血;對于多腔靜脈導管,樣本應取自所有管腔(每個管腔取相同體積),分別進行血培養(yǎng)。單獨送檢經(jīng)導管抽取的血液或單獨送檢導管而不配套采集經(jīng)皮穿刺血培養(yǎng)不能判斷CRBSI。
建議采集者在采集前進行手衛(wèi)生消毒,并且佩戴適當大小的一次性手套或無菌手套。去除血培養(yǎng)瓶上的塑料帽,用75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶頂部塑膠塞,自然干燥60s;再對擬采血部位進行皮膚消毒,可根據(jù)患者的年齡、過敏史等選用碘伏、≥2gL氯己定-乙醇(70%)溶液、70%~80%乙醇溶液、70%異丙醇等消毒劑。消毒擦拭方法、時間和等待干燥的時間嚴格遵循產(chǎn)品的使用說明,建議成人皮膚消毒面積直徑為6~7cm。皮膚消毒后血管穿刺前不能再次觸診靜脈(如有必要,應戴無菌手套)。
建議使用注射器或蝶形針采血,按照瓶上的刻度線采集到推薦的血量。使用注射器采集血液后勿換針頭,直接注入血培養(yǎng)瓶、如果采血量充足、先注入?yún)捬跗浚僮⑷诵柩跗?;如果抽血量少于推薦的血量,應優(yōu)先保證需氧瓶的血量達到8ml,剩余的血液接種到厭氧瓶。使用蝶形針采血,采集過程中應保持培養(yǎng)瓶直立放置,位置低于患者手臂、先注入需氧瓶,再注人厭氧瓶。血液注入血培養(yǎng)瓶后,立即輕輕上下傾倒幾次混勻,以防血液凝固,穿刺采集第2套血培養(yǎng)標本時應更換注射器針頭或蝶形針。
建議根據(jù)臨床初步診斷選擇需氧瓶、厭氧瓶、兒童瓶、真菌培養(yǎng)瓶和分枝桿菌培養(yǎng)瓶。大多數(shù)念珠菌可以在需氧瓶中生長,一些念珠菌(如光滑念珠菌)在厭氧瓶生長更快??紤]除酵母菌以外的其他真菌引起的血流感染時,需增加一個真菌培養(yǎng)瓶。對于已經(jīng)接受抗微生物藥物治療的患者,建議使用含抗微生物藥物吸附劑或中和劑的培養(yǎng)瓶。有添加劑的培養(yǎng)瓶可以培養(yǎng)出更多微生物,特別是葡萄球菌和酵母菌。
在血培養(yǎng)標本采集完成后,建議立即貼上標簽、標簽的位置勿遮蓋培養(yǎng)瓶條碼及血量檢測區(qū)、并注明采集時間(精確到分鐘)。
血培養(yǎng)瓶的保存和運送
建議將血培養(yǎng)瓶放入專門的標本運送容器內(nèi),防止其掉落和互相碰撞。如果通過氣動管道系統(tǒng)運送,事先應評估血培養(yǎng)瓶放置是否足夠牢固。建議血培養(yǎng)標本在采集后2h內(nèi)(最遲不超過4h)送至實驗室,室溫(20~25C)運送,運送條件須符合生物安全要求。如果運送延遲,應置于室溫(20-25℃)保存,切勿冷藏或冷凍。
對于所有超過2h接收的血培養(yǎng)瓶,須注意觀察其生長指標,例如傳感器的顏色、溶血、氣體、渾濁度等,如果涂片染色發(fā)現(xiàn)有細菌生長,應與陽性瓶一樣對待。
不能提供24h樣本接收服務的實驗室,可以在臨床科室(如急診、重癥監(jiān)護室)設立小型的血培養(yǎng)系統(tǒng),即“衛(wèi)星血培養(yǎng)”,但應遵循一定的生物安全管理要求。文獻表明,衛(wèi)星血培養(yǎng)從樣本收集到陽性報警平均縮短10.1h,臨床首次藥物處方調(diào)整時間也由原來的64h縮短為42.8h。