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化學(xué)發(fā)光試劑注意事項(xiàng),允許步驟2-5在日光燈下進(jìn)行方便操作,但在強(qiáng)光下操作時(shí)間拖得太長(zhǎng),靈敏度可能會(huì)有一定程度降低,移到暗房操作可避免之.戴手套可以避免在膜上留下手印.長(zhǎng)時(shí)間曝光或蛋白過(guò)量,將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系.與工作液孵育1-5分鐘后膜上的條帶發(fā)光.強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn),低豐度蛋白條帶可能發(fā)光較弱,但仍可成功進(jìn)行X光膠片曝光.不能簡(jiǎn)單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間.熒光可持續(xù)10小時(shí)以上,條帶弱時(shí)可延長(zhǎng)曝光至1-10個(gè)小時(shí).
化學(xué)發(fā)光試劑由于超敏發(fā)光液及其靈敏,對(duì)大多數(shù)來(lái)源的進(jìn)口抗體我們強(qiáng)烈推薦抗體的起始濃度為一抗1:1000，二抗1:2000。通常為一抗1:2000二抗1:4000或更加稀釋。 抗體濃度過(guò)高將造成高背景或沒(méi)有條帶,導(dǎo)致失敗.某些保鮮膜包裹印跡膜時(shí)可能會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜.使用預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定條帶位置和大小.
化學(xué)發(fā)光試劑實(shí)驗(yàn)前,先將實(shí)驗(yàn)中所需的所有試劑及待測(cè)樣品從冰箱中取出,待溫度與室溫（25℃）平衡1小時(shí)以上后使用.加樣前應(yīng)將所用試劑和待測(cè)樣本分別充分混勻.酶結(jié)合物和抗體混勻時(shí),切忌產(chǎn)生大量氣泡.實(shí)驗(yàn)中用于凍干品復(fù)溶和稀釋濃縮洗滌液所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量.凍干品加入蒸餾水或去離子水后,應(yīng)蓋上膠塞后靜置，待固體物質(zhì)完全溶解后，再將試劑瓶反扣在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，讓附著在瓶蓋上的固體物質(zhì)溶解，然后充分混勻后待用.
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